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一种4-1BBL蛋白的制备方法
来源: 作者:王巍 时间:2016-01-04 09:41:37 点击:22

  成果或技术描述

(一)背景技术

4-1BB/4-1BBL是CD28/B7之外的另一对重要的协同刺激信号分子。4-1BB(CD137)主要分布在活化的T细胞、NK细胞和DC细胞等表面,其配体4-1BBL(CD137L)主要表达在专职APC细胞(如单核巨噬细胞、DC细胞、B细胞)、活化的T细胞及一些肿瘤细胞上。4-1BBL是II型跨膜糖蛋白,分子量为34KD,人和小鼠有36%的同源性。

4-1BB/4-1BBL信号对增强和维持免疫应答有重要作用。与CD28/B7信号传导通路比较,4-1BB/4-1BBL主要在免疫应答的后期,为CD8+T细胞克隆扩增、存活和记忆性杀伤提供信号,具有明显刺激T细胞增殖和分泌细胞因子的作用。因此,4-1BB/4-1BBL信号传导通路近年已成为肿瘤免疫治疗设计的一个新靶点。实验表明,4-1BB/4-1BBL信号能预防活化诱导的细胞死亡(AICD),促进荷瘤宿主中淋巴细胞的增殖,并选择性促进Ⅰ型细胞因子分泌,增强效应细胞的抗肿瘤作用。这种抗肿瘤作用对肿瘤的再次攻击有记忆性,证实有长期的抗肿瘤免疫反应存在。研究还发现,融合蛋白Ig-4-1BBL与抗-4-1BB抗体一样能有效诱导肿瘤持续的特异性CTLs,治疗小鼠肝结肠癌。

综上,4-1BBL重组蛋白在人类肿瘤和感染性疾病免疫治疗中有较好的应用前景。

(二)发明内容

现有技术对4-1BBL蛋白的制备方法是直接从组织细胞提取,得率低、成本高,不能大量应用于体内试验或临床。为了提高4-1BBL蛋白的得率,降低成本,为制备临床前试验用药或诊断试剂提供大量的原材料,本发明自主研发了一种4-1BBL蛋白的制备方法,所述方法是采用小鼠4-1BBLTNFSF9NP_033430.1)胞外段蛋白的cDNA以基因工程方法制备含206个氨基酸残基(Arg 104-Glu 309)的重组4-1BBL蛋白。采用本发明方法,可大量获得4-1BBL蛋白,大大提高了蛋白得率,获得的4-1BBL胞外段蛋白可以应用于制备对4-1BBL蛋白定量的临床前研究试剂盒或药用,应用前景广阔。

照片:

1为重组蛋白4-1BBLT细胞增殖实验的分析(cpm)。

 

2为小鼠T细胞48h培养上清液的IL-2水平(ng/L)。

3为小鼠T细胞48h培养上清液的IFN-γ水平(ng/L)。

采用本发明方法获得的4-1BBL胞外段蛋白,经刺激体外培养的小鼠T淋巴细胞,能有效增强CD3单抗活化的T淋巴细胞增殖(相对增强率为25.6%)及分泌IL-2(相对增强率为53.2%)、IFN-γ(相对增强率为65.5%)等细胞因子,显示具有显著的T细胞协同刺激作用(图1~3)。

成果用途:

本方法获得的4-1BBL胞外段蛋白可应用于制备对4-1BBL蛋白定量的临床前研究试剂盒或药用,应用前景广阔。

市场预测:

可生产4-1BBL胞外段蛋白产品,用于制备对4-1BBL蛋白定量的诊断试剂盒,以及抗肿瘤、抗感染等免疫治疗临床前研究的小鼠体内实验。

关键词:4-1BBL,蛋白,体内试验,免疫治疗

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